7.数据分析:一种是统计细胞迁移的距离,一种是统计划痕面积。都可以用ImageJ软件来进行分析。
注意事项或经验分享:
1.直尺和马克笔等工具用前务必照紫外消杀。
2.种板所用细胞数目可根据细胞的生长快慢调整接种数量。保证每组细胞铺板密度一致,保证每孔务必铺匀。
3.提前用马克笔画好线,避免细胞种板后不好操作。枪头画线之前,不要弃去原培养基,否则划下来的细胞团块会堆积在划痕边缘上堆积导致宽度不统一。
错误示例:
4.用枪头画线时,要用力均匀一致,垂直稳定一气呵成,避免宽度差别较大不利于结果分析的准确性。
5.根据交叉点定位拍照,避免了前后观察时位置不固定的问题,结果更有说服力。
6.务必清洗干净划下来的活细胞,避免在拍照期间细胞贴壁在划痕处并进行增殖影响结果。
7.0h拍照时可以在试验记录本上标记拍照位置,以便下各时间段拍摄同一位置。
8.拍照时注意不要露出马克笔画的线条,不要镜头过于模糊,尽量不要选择边缘的光影差别过大的位置,切换镜头时不要忘记换标尺,否则都会影响结果的自动分析。
错误示例:
9.根据细胞种类,选择无血清或低血清培养基来降低细胞增殖的影响,或用丝裂霉素(1μg/ml)处理1h,抑制细胞的分裂,消除增殖的影响。但同时也会影响细胞迁移的速度。
10.一般拍照时间为0,2,4,6,8,10,12,16,24小时等选取,不建议超过24h,过度增殖造成实验假阳性结果。
11.手工划痕可能难以保证宽度一致性,culture Insert是现在市面上也推出的一种可以提前占据划痕区域的模具,将细胞接种于Dish中间的Insert培养,细胞长满Insert区域后用镊子移除Insert产生笔直且无细胞损伤的划痕。
示例:
12.分析结果中长度法,由于细胞迁移并不是齐头并进的,可能组间差异大,建议用平均多条距离的值来代表。
示例:
分析结果中面积法,用软件中魔棒工具自动识别边缘比人工画线更为准确,但是对于迁移过满导致分开的间隙不太好识别。
示例:
本文作者是"胡图图"同学,在获得授权后,实验老司机将本文发表于公众号。
文稿:胡图图
校对:煲仔饭
素材:Canva
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https://ibidi.com/content/282-creating-the-gap